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    RT-PCR試劑盒檢測RNA濃度和純度說明

    更新時間:2024-03-14點擊次數:1760
    RT-PCR試劑盒適用于以RNA為模板合成一鏈cDNA的反轉錄,以及后續的PCR擴增實驗。本試劑盒選用優異的M-MLV RT酶,可以合成大于5kb的一鏈cDNA;反轉錄過程中的特異的RNase抑制劑可有效降低由于外源RNase污染而導致實驗失敗的風險。本試劑盒使用方便、快捷,可廣泛用于cDNA克隆及目的基因檢測等分子生物實驗。

    RNA濃度和純度分析:

    濃度計算:對于單鏈RNA,OD260=1.0時,RNA濃度為40μg/ml,稀釋時OD260=0.1時,其RNA濃度為4μg/ml。

    純度分析:純凈的RNA樣品其OD260/OD280的比值應介于1.8-2.0。小于此比值說明有蛋白或苯酚污染,如果比值大于2.0,則可能被異硫氰酸胍污染;OD260/OD230比值應大于2.0,如果小于此比值說明有小分子及鹽類污染。

    濃度測定:

    使用RNA濃度測定儀,測定樣品A260和A280值。根據A260/A280比值,估測RNA質量。一般A260/A280比值在1.8-2.0之間,可以滿足實驗要求。在100μl RNA原液中取1μl稀釋至250μl(DEPC處理的水),測定樣品的A260和A280的值,按下列公式計算其濃度:

    RNA原液濃度=A260×稀釋倍數×40(ng/μl)。

    測定RNA濃度基本操作步驟:

    1.取1μl RNA原液,放在0.5ml EP管中,加入249μl dd H2O,用移液槍反復混勻。

    2.用dd H2O為空白對照,調節A260零點。

    3.倒掉比色杯中的水,加入稀釋并混合均勻的RNA樣液,測定A260值。倒掉比色杯中的RNA樣液,用dd H2O沖洗比色杯,再調節A280零點。

    4.倒掉比色杯中的水,加入稀釋并混合均勻的RNA樣液,測定A280值。計算A260/A280比值,比值≥1.8,滿足實驗要求。

    5.RNA原液濃度=A260×稀釋倍數×40(ng/μl)。

    TEL:021-61210612

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